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2024-07-18
公司热点前段时间，我们实验室培养了两份同样来源的血液样本，NK细胞收获结果截然相反，一份样本结果特别好，另一份样本细胞完全没长出来。查来查去最后发现是二氧化碳培养箱出了问题……
在细胞培养实验中，影响实验结果的因素多种多样，有一些我们都能想到的因素，比如是否发生污染、操作是否正确、培养工艺是否足够好、培养基性能是否优秀等，这些都会影响细胞实验的结果。
但还有一些我们不容易想到的因素——仪器设备是否靠谱，比如离心机转速是否稳定、培养箱显示的参数和实际情况是否有差异、超净工作台是否真正能达到无菌……这些因素对细胞实验的结果影响不可小觑。
QUESTION:细胞实验中常用仪器设备该怎么维护保养？
一、培养箱
培养箱为细胞的体外培养提供了适宜的温度、湿度和气体环境，日常对培养箱的维护保养非常重要，在使用过程中要注意以下几点：
1 | 定期校准二氧化碳培养箱是确保其稳定性和精确性的关键。建议按照制造商的指南进行校准，通常是每六个月或一年一次。 |
2 | 校准过程中需要使用校准气体，确保其纯度和稳定性。校准气体的选择应符合国际标准，并在校准前进行适当的准备和检查。 |
3 | 除了二氧化碳浓度外，还需要校准温度和湿度传感器。这确保了培养箱内部环境参数的精准性，对生物样本的培养至关重要。 |
4 | 箱内培养物不应放置太挤，以保证培养物受温均匀。各层金属孔架上放置物品不应过重，以免将金属孔架压弯滑脱，打碎培养物。 |
5 | 培养箱工作时，应避免频繁开门，以保持温度稳定，同时防止灰尘污物进入。停止使用，关闭总电源键及设备后部的电源开关。 |
6 | 清洁培养箱时，用浸泡酒精的纱布擦拭箱体内壁进行消毒，然后用干纱布将酒精擦除干净。 |
二、离心机
离心机在细胞的培养过程中起到非常重要的作用，好的离心效果便于控制细胞浓度，还可以保证细胞转移的完全性。对离心机的日常维护保养应注意以下几点：
1 | 定期检查离心机腔内部有无样品、灰尘聚集或破损采样管遗留的玻璃残渣，并按要求清洁。 |
2 | 定期校准离心机的参数是保证其准确运行的关键步骤。根据厂家提供的说明书或使用手册，使用合适的校准工具对离心机进行参数校准，例如校准转速、定时器等。 |
3 | 定期检查离心机的零部件是否完好无损，如转子是否有损伤或变形，离心杯是否有裂纹等。如果发现任何问题，应及时更换或修复。 |
4 | 在进行定期维护时，务必记录维护的日期、维护项目以及维护的结果。这样可以及时了解离心机的维护情况，并在必要时进行修复或适当调整。 |
分离人PBMC对离心机的要求：
1 | 选择支持升降速调节的离心机品牌，如果离心机不可设置升降速档次，PBMC层会比较模糊。（升速：指开始启动→达到设定离心力的时间；降速：设定离心时间完成→机器完全停止。） |
2 | 不同品牌的离心机对应的升降速档位参数有所不同（具体参数请咨询离心机厂家），离心机使用时调整为慢升慢降，建议升速时间、降速时间均控制在3分钟左右。升速过快容易导致细胞挤压、破裂，降速过快容易让分离好的样本再次混合。 |
3 | 分离人血液单个核细胞十分考验离心机的稳定性能，建议定期校准离心机的升降速，一般为一年或每5000次使用。 |
4 | 离心速度太慢或离心时间太短都有可能导致非淋巴细胞难以完全沉淀。分离时的转速与时间根据不同样品相应调整。离心速度在2000-2500 r/min，离心时间为15-30 min。 |
三、超净工作台
超净工作台通过风机将空气吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域达到百级洁净度，保证生产对环境洁净度的要求。对超净工作台的日常维护保养应注意以下几点：
1 | 根据环境的洁净程度，可定期（一般2～3个月）将粗滤布（涤纶无纺布）拆下清洗或给予更换。 |
2 | 定期（一般为一周）对环境周围进行灭菌工作，同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果。 |
3 | 当加大风机电压已不能使风速达到0.32m/s时必须更换高效空气过滤器。 |
4 | 更换过滤器时，可打开顶盖，更换时应注意过滤器上的箭头标志，箭头指向即为层流气流向。 |
5 | 更换高效过滤器后，应用Y09-4型尘埃粒子计数器四周边框密封是否良好，调节风机电压，使操作区平均风速保持在0.32-0.48m/s范围内，再用Y09-4型尘埃粒子计数器检查洁净度。 |
细胞培养是细胞实验中最基础也最必要的步骤，其中用到的设备仪器也起到至关重要的作用。因此，在日常使用设备仪器的过程中，要注意对仪器的保养和维护，定期校准设备参数，避免因为这些小细节而酿成大的失误！
