干细胞培养难度大,需要充足的营养成分对其进行支持,对于培养体系及试验人员的技术的也有更高的要求。目前常用的标准培养方法有三种:传统的饲养层培养法和无饲养层培养法,以及近几年新兴的干细胞直接培养法。
饲养层培养方法:饲养层培养法,先对饲养层细胞进行培养,再将干细胞接种到饲养层细胞上,最后收获所需的干细胞,该过程需要一周或更长的培养时间。优点是培养干细胞效果相对较好;缺点是实验流程冗杂,使用的试剂复杂,实验周期很长,对实验人员的熟练度有较高要求。
五饲养层培养方法:无饲养层培养法,直接培养干细胞,无需培养饲养层细胞。优点是培养流程简单;缺点是需自行优化培养液,有时需要花大力气去测试血清、培养基及添加因子的种类和比例,非常耗时耗力,且培养出来的干细胞稳定性也不太容易保证。
干细胞直接培养方法:干细胞直接培养法是近几年,随着干细胞专用培养基的诞生,逐渐开始的干细胞培养法。干细胞直接培养,无饲养层细胞参与。加入的培养液是已经商业标准化的干细胞专用培养基,大多无需配制,可直接使用。优点是培养液无需探索配方, 可直接使用;实验流程简单;缺点是由于不同厂家的干细胞专用培养基的配方不同,所以有相当多的干细胞挑不到合适的完全培养基,培养效果不好。很多价格昂贵,是传统培养液(胎牛+普通培养基+添加细胞因子)数倍。