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如何进行核酸检测?

2023-09-20

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核酸检测包括一系列分子生物学的方法,例如聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),核酸杂交,基因测序等,应用于传染病监测,肿瘤、生殖医学,农业等各个领域。根据检测目的的不同,选择不同的检测方法。我们目前常说的核酸检测主要是指聚合酶链反应(PCR),也是目前确定是否感染新冠病毒的最主要手段。

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PCR技术以选定的特异性核酸区域为靶标,基于核酸的复制原理和规律,每一轮扩增都会使目标核酸片段成倍递增,直到可以被特定的仪器检出。通过数轮扩增,目标核酸片段可达到起始量的数百万倍。

在传统PCR技术的基础上,又发展出了实时荧光PCR。实时荧光PCR是在扩增体系中引入了能与目标核酸片段结合的特异性荧光标记探针,从而达到实时监测PCR扩增反应的目的。每一轮扩增都会累计荧光信号,扩增出的目标序列越多,累积的荧光信号就越强,当累计的荧光信号高于设定的阈值时,可认为是阳性信号,荧光信号达到阈值所需要的PCR循环次数即为Ct(threshold cycle,Ct)。目标核酸片段起始量越高,荧光信号达到阈值所需要的循环数越少,Ct值越小。当荧光信号在一定循环次数内可以达到阈值时,即Ct小于一定数值时,目标核酸检测为阳性。