南京疫情的传播链仍在继续延伸,疫情“多点爆发”,全国各地又恢复紧张的防控状态,全面开展核酸检测工作。在这紧张的环境下,如何避免“假阴性”乃是疫情防控的重中之重。所以,病毒采样管的选择是保障核酸检测准确性的利刃。
江南jn体育官方网站注意到,大部分厂家的病毒采样管并没有添加洗脱珠。众所周知,样本采集后的采样管,需涡旋振荡使样本充分从拭子中释放至采样液。江南jn体育官方网站认为,仅靠振荡并不能有效提升样本释放率,所以坚持在采样液中添加特殊处理的洗脱珠,振荡产生的涡旋驱动洗脱珠撞击采样拭子,使黏附在拭子上的病毒颗粒完全释放至采样液。
那么采样液中的洗脱珠是否能够有效促进样本释放,降低“假阴性”,江南jn体育官方网站用以下实验论证——
实验材料
病毒采样管:去除洗脱珠的江南jn体育官方网站MT0501-7-3灭活型采样管为实验组;包含洗脱珠的江南jn体育官方网站MT0501-7-3灭活型采样管为对照组。每组设置两个重复。
拭子:江南jn体育官方网站7cm折断点植绒拭子。
检测病毒:高浓度PEDV病毒;低浓度PEDV病毒。
核酸提取试剂盒:江南jn体育官方网站免裂解核酸提取试剂(磁珠法)。
其它材料:江南jn体育官方网站病毒分离无血清培养基用于稀释病毒液;痰液混合液用于模拟黏性样本。
实验步骤
1、病毒液的准备。取病毒原液,采用江南jn体育官方网站病毒分离无血清培养基进行倍比稀释后得到高浓度病毒液;再对之稀释10倍,得到低浓度的病毒液。两种浓度的病毒液均准备1mL。收集痰液1mL,与病毒液混合,混合后高浓度组病毒为3×104 copies/mL,低浓度组病毒为6×103 copies/mL。
2、采样管的准备。采样管分为有洗脱珠和无洗脱珠2种,均配套用7cm折断点拭子。
3、模拟采样过程。取病毒与痰液的混合液100uL于1.5mL离心管中,用拭子将之完全吸取,然后将拭子折断至采样管中,旋紧管盖。假设病毒在采样液中充分释放,则高浓度组病毒为1×103 copies/mL,低浓度组病毒为2×102 copies/mL。
4、核酸提取与检测。提取核酸之前,先将各组管子在涡旋振荡器上振荡1分钟。采用江南jn体育官方网站免裂解核酸提取试剂(磁珠法)进行核酸的提取。提取完成后对各组进行RT-qPCR检测。
实验结果
含洗脱珠组与去洗脱珠组扩增曲线图及各组Ct值统计:
实验结论
1、去除洗脱珠后,会导致相同提取条件下核酸的得率更低。
2、在临界的病毒浓度下,采样管中无洗脱珠可能会导致检测结果呈现假阴性。
目前,疫情防控形势不容乐观,多发、散发情况接连出现,各地区都时时刻刻绷紧防控筛查这根弦。而实际病毒采样的过程中,各种不确定因素不时发生,影响核酸检测的准确性,选用一款稳定好用的病毒采样管至关重要。
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